The CDK inhibitor CR8 acts as a molecular glue degrader that depletes cyclin K - Nature
← DDB1 (CUL4A adaptor protein; E3 ubiquitin ligase의 component) 발현량이 증가할수록 CR8 toxicity가 증가하더라. → 뭔가 CR8의 작용 기작이 E3 ubiquitin ligase와 연관되어 있을 것 같다.
PRISM repurposing dataset에서 확인한 결과.
← DDB1을 CRISPR-mediated inactivation 시키면 CR8의 toxicity가 사라지더라.
즉, CR8의 toxicity에는 DDB1이 필요하다.
← CR8 처리 시 Cyclin K의 단백질 양이 감소하더라.
CR8이 Cyclin K를 E3 ubiquitin ligase-dependent 하게 분해하는 건가?
Tandem mass tag mass spectrometry 로 whole proteome quantification 수행함.
← MLN~ 들은 E3 ubiquitin ligase 혹은 단백질을 분해하는 proteasome의 작용을 억제하는 compound라고 보면 됨.
이런 compound 처리 시에 CR8이 Cyclin K를 분해하지 못하는 걸 보면 CR8의 Cyclin K 분해에는 E3 ubiquitin ligase의 작용과 proteasomal degradation이 필요하다는 걸 알 수 있음.
← Genome-scale CRISPR screening으로 어떤 유전자들을 inactivation 시켰을 때 CR8 저항성이 나타나는지 확인함.
cullin-RING E3 ubiquitin ligase의 활성화에 필요한 유전자들이 매우 상위에 잡힘.
→ genetic evidence
← 같은 방식으로 genome-scale CRISPR screening을 수행하여 CR8-induced cyclin K degradation 에 필요한 유전자가 무엇인지 확인함.
DDB1과 CDK12에 주목함.
DDB1은 E3 ubiquitin ligase의 component.
CDK12는 원래 알려진 CR8의 target. (CR8은 원래 CDK inhibitor로 사용되던 약물)
→ CDK12와 CR8의 결합이 Cyclin K의 분해에 꼭 필요하다는 것인가?
